NIBSC16/250 KRAS基因第12、13号密码子突变国际标准物质储存条件

预期用途该小组包括八个单独编码的安瓿,每个安瓿含有从人类细胞系提取的冷冻干燥、纯化的基因组DNA(gDNA)。该面板包括七种材料,每种材料具有不同的KRAS密码子12或13基因型、共有突变百分比、共有突变体和每二倍体人类基因组的总KRAS拷贝数。此外,该面板还包括七种KRAS密码号12和13基因型中每种的gDNA纯合野生型材料(材料代码16/266)。携带感兴趣的KRAS突变的材料可以通过应用每种材料特有的计算来稀释,以产生KRAS一致突变百分比范围内的标准品。该面板旨在用作校准二级标准品、试剂盒和分析的一级标准品。这些材质并非用作管路控制。这些材料由外部实验室进行了测试,并显示出适合作为下一代测序(NGS)、桑格测序、实时PCR、焦磷酸测序、数字PCR(dPCR)、基质辅助激光解吸/电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱分析(MassARRAY®)、KRAS StripAssay®、高分辨率熔体分析(HRM)、扩增难降解突变系统PCR(ARMS-PCR)、PCR反向序列特异性寡核苷酸探针技术(PCR-rSSO)、小序列和限制性片段长度多态性分析(RFLP)的标准。该小组由世界卫生组织(世界卫生组织)生物标准化专家委员会于2017年成立,是世界卫生组织第一个基因组KRAS密码子12和13突变、NIBSC代码16/2501的国际参考小组。这些材料不应用于任何其他用途。数据分析必须集中在KRAS上。不得试图确定来源材料供体。

该制剂不适用于人类或人类食物链中的动物。对该小组制剂中使用的细胞系进行了测试,并通过PCR发现HIV1、HTLV1、HBV和HCV呈阴性。在面板的制备中使用了EB病毒转化的淋巴母细胞系。EBV是英国危险病原体咨询委员会分类的第2类病原体。EBV序列可能存在于这些材料中,但DNA是使用蛋白质变性和去除的方案制备的,因此可能使病毒失活。然而,活病毒存活的可能性是无法消除的。与所有生物来源的材料一样,这种制剂应被视为对健康有潜在危害。应根据您自己实验室的安全程序使用和丢弃它。此类安全程序应包括佩戴防护手套和避免产生气溶胶。打开安瓿或小瓶时应小心,避免割伤。

该小组在一项国际合作研究中进行了测试,该研究涉及56个实验室和68种测试方法。八种材料中每种材料的基因型和一致突变百分比是通过最一致的方法NGS和dPCR获得的(表1)。最终用户能够使用基于突变体和总KRAS拷贝数的稀释公式进一步稀释突变体材料(具有野生型KRAS密码子12和13材料16/266,或校准到材料16/266的另一种野生型基因组DNA),以在较低一致突变百分比的范围内实现进一步的标准,由此可以实现测定校准,见下文第7节和附录I。

表1。面板16/250的八种材料的一致值。显示了KRAS(NM_033360.3)基因型、一致突变百分比和一致KRAS拷贝数,用于计算如何稀释每种突变材料以在较低突变水平下制备进一步的标准品。*小数点后两位用于捕获低水平的野生型等位基因。

NIBSC16/250 KRAS基因第12、13号密码子突变国际标准物质生物材料来源国:英国。该小组包括八个单独编码的安瓿,每个安瓿含有从人类细胞系中提取的约5µg冷冻干燥、纯化的基因组DNA(材料16/266为25µg)。使用“盐析”法提取基因组DNA,并在冷冻干燥前用5mg/ml海藻糖在Tris-EDTA缓冲液中稀释。

NIBSC16/250 KRAS基因第12、13号密码子突变国际标准物质将所有未开封的冻干材料安瓿储存在-20°C或以下。请注意:由于冻干材料的固有稳定性,NIBSC可能会在环境温度下运输这些材料。