牛血清白蛋白总蛋白标准品NIST SRM 927f附加分析

牛血清白蛋白总蛋白标准品来源和准备:SRM 927f由Equitech-Bio,股份有限公司(德克萨斯州克尔维尔)准备和包装。源牛血清是在美国农业部注册的机构生产的,仅用于制造用于体外诊断、研究和进一步制造或技术目的的产品。使用0.02mol/L氯化钠将该SRM的BSA从30%BSA商业储备(Equitech-Bio,股份有限公司,Kerrville,TX)稀释至约7%,并用氢氧化钠将pH调节至6.5至6.8。通过膜过滤对材料进行消毒,将其放入无菌玻璃氩气冲洗安瓿中并火焰密封。

分析:SRM 927f价值分配中的所有分析均在NIST进行。

NIST SRM 927f通过氨基酸分析(ID-LC/MS/MS)测量BSA浓度:氨基酸分析方法涉及同位素稀释液相色谱/串联质谱(ID-LC/MS/MS)[3]。SRM 927f和SRM 927e(作为对照)的未衍生样品被稀释,然后与苯丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的稳定同位素标记的类似物结合,然后在密封的压力容器中用液相盐酸(HCl)在约130ºC下水解48小时。水解后,将样品冻干,然后用0.1mL/L甲酸在水中重构。在含有嵌入酸性离子配对基团的反相分析柱上,使用梯度洗脱混合模式色谱法分离氨基酸。在三重四极质谱仪上进行测量,监测每种氨基酸的特定转变。使用由具有已知纯度和不确定度的市售氨基酸认证参考材料制备的溶液校准测量值。收集了苯丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的数据。基于BSA的已知氨基酸序列,使用适当的摩尔质量和摩尔化学计量,根据每种氨基酸测定的质量分数计算BSA的质量分数。BSA浓度被确定为BSA质量分数乘以SRM 927f(如下所述)的密度的乘积,并以克/升为基础进行校正。

BSA浓度的测量(缩二脲):使用缩二脲参考法测量血清总蛋白的参考BSA浓度[1]。测量涉及当前SRM 927f和先前发布的SRM 927e之间的直接比较,并且通过分光光度法进行。

牛血清白蛋白总蛋白标准品NIST SRM 927f附加分析:密度测量采用重力测量法[4]。使用液相色谱/质谱法(LC/MS)测定相对平均分子质量。使用市售C18柱并添加0.1mL/L三氟乙酸作为离子配对剂,通过LC在正离子模式下操作的飞行时间质谱仪上进行测量。通过将流动相乙腈含量从200 mL/L增加到950 mL/L(平衡水)进行反相梯度洗脱。在SRM 927f中发现的四种主要形式的BSA的相对平均分子量按丰度递减顺序显示在表3中。这种材料的先前发行的SRM 927e和SRM 927d具有相似的分子质量范围。

同质性分析:在进行认证分析时进行同质性评估。设计了一个分层抽样计划来测试安瓿批次的均匀性。当对照安瓿的制备顺序绘制时,数据没有明显的趋势。