CRM-GTX1和4-e的制备
加拿大NRC膝沟藻毒素1和4认证校准溶液CRM-GTX1&4-e利用制备规模色谱法从培养的亚历山大藻中分离出Gonyautoxin-1和-4（GTX1&4）[4]。使用LC-MS/MS[5，6]（图1和图2）和1H NMR确认结构和纯度。对于C10H18N7O S+，测得的准确m/z为412.0873（∆=2 ppm使用LC高分辨率MS（LC-HRMS）测定GTX1和GTX4的[M+H]+离子。通过LC-ox-FLD[7]（图3）、毛细管电泳紫外检测（CE-UVD）[8]和液相色谱化学发光氮检测（LC-CLND）[9]进一步评估纯度。将纯化的GTX1&4在真空下干燥并溶解在过滤的0.5mM HCl水溶液中，得到储备溶液，该储备溶液使用1H-NMR（qNMR）进行定量[10]。CRM-GTX1&4-e溶液是通过在pH为3.5的过滤（0.2µm）和脱气的0.5mM HCl中对原液进行精确稀释而制备的。将等分试样分配到充满氩气的琥珀色玻璃安瓿中，并立即进行火焰密封。每个安瓿含有大约0.5毫升溶液。
分析方法与价值分配
CRM-GTX1和4-e的认证值（表1）基于NRC使用两种分析方法获得的结果：使用邻苯二甲酸氢钾（NIST SRM 84L）进行校准的qNMR和使用NRC CRM-GTX1&4-d进行校准的LC-MS/MS。
CRM-GTX1&4-e中存在的低水平gonyautoxin-2和-3（GTX2&3）以及脱羧酰基gonyautosin-1和-4（dcGTX1&4）通过LC-MS使用NRC CRM分配信息值。
同质性
加拿大NRC膝沟藻毒素1和4认证校准溶液CRM-GTX1&4-e代表性数量的CRM-GTX1和4-e安瓿是从整个灌装系列中选择的。GTX1和GTX4反应通过LC-MS/MS测定。未观察到异质性。
稳定性
加拿大NRC膝沟藻毒素1和4认证校准溶液CRM-GTX1&4-e稳定性研究表明，GTX1和GTX4在+4°C温度下储存在密封安瓿中的盐酸水溶液中具有良好的稳定性。
不确定性
考虑并测量了与CRM-GTX1和4-e表征相关的所有合理误差源。总体不确定性估计（UCRM）包括与批次表征（uchar）和储存过程中的不稳定性（ustab）相关的不确定性[11-14]。这些组分列于表3中，
安全说明
加拿大NRC膝沟藻毒素1和4认证校准溶液CRM-GTX1&4-e如果摄入足够的量，GTX1&4和相关毒素可能导致瘫痪甚至死亡。只有合格的人员才能处理溶液，并应使用适当的处理方法。在玻璃破碎的情况下打开安瓿时，应使用合适的个人防护装备。CRM-GTX1和4-e提供了安全数据表（SDS）。
有效期
加拿大NRC膝沟藻毒素1和4认证校准溶液CRM-GTX1&4-e如果在建议的+4°C的储存条件下未开封储存，则CRM-GTX1和4-e的认证浓度有效期为自销售之日起1年。
计量溯源性
本证书中的结果可通过重量法制备的邻苯二甲酸氢钾标准品CRM（NIST SRM 84L）和GTX1&4（NRC CRM-GTX1&4-d）追溯到SI（Système international d’unités）。