培养基的制备方法

培养基的制备方法

培养基一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料。不用的培养基的成分不同,但是步骤却大径相同。

培养基的制备方法

1.配料

配方换算→在容器中加入少量水(蒸馏水,自然水)→按照配方称取各种药品(依次加入)→加足所需水量(一药一勺,取药后立即盖上瓶盖)。

  1. 溶解

淀粉溶解:少量冷水调成糊状

加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95-97℃ ,且需要边加热边搅拌以防止烧焦。

  • 调PH

用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。

  • 过滤

滤纸或棉花进行过滤。(有时可以省去)

  • 分装

一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。

  • 三角瓶

若作静置培养,则100ml培养基/250ml的三角瓶,最多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15-20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。

  • 试管分装

液体培养基一般装4-5ml,约试管的1/4高度;

固体斜面培养基一般装3-4ml,约试管的1/5高度。

  • 包扎

分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

  • 灭菌

按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。

  • 摆斜面

灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。

  • 贮存

培养基在30℃下放置一天,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。

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