| 产品货号 | SRM 998/ NIST SRM 998 |
| 产品名称 | Angiotensin I (Human) |
| 中文名称 | 血管紧张素I（人）/人血管紧张素I/人血管紧张素I标准物质/人血管紧张素I标准品 |
| 产品规格 | 0.5 mg |
| 产品详情 | 本标准参考物质（SRM）主要用于肾素测定的校准和标准化，并作为氨基酸分析和高效液相色谱（HPLC）的参考肽。SRM 998的一个单位由0.5mg化学合成的血管紧张素I组成。 |
| 产品有效期 | 自装运之日起5年 |
| 证书更新时间 | 19-May-21 |
| 储存温度 | 冷冻-20摄氏度/有关此材料的存储信息，请参阅证书。 |
| 危险等级 | 非危 |
| 易腐类型 | 这种材料易腐烂，干冰运输 |
人血管紧张素I标准物质来源、制备和分析（1）
NIST SRM 998该材料从Beckman Instruments，股份有限公司，Bioproducts Operations（Palo Alto，CA）获得。
使用在5000 kPa压力下操作的25 cm x 0.4 cm十八烷基硅烷柱，对溶解的25µg该SRM样品进行液相色谱。将样品溶解在81体积份0.1mol/L pH为3.5的磷酸三乙胺缓冲液和19体积份乙腈的溶液中。使用了两种洗脱液溶液：一种是用于溶解SRM的相同组成的溶液；另一种是75体积份缓冲液与25体积份乙腈的溶液。通过在215nm和280nm处测量吸光度来监测洗脱。在81∶19的洗脱液比下，在215nm处检测到保留时间分别为16.6分钟和12.2分钟的主峰和次峰，并且在280nm处仅检测到主峰。收集对应于每个峰的材料，在6mol/L HCl中水解并分析氨基酸组成。主峰的氨基酸含量表明它是血管紧张素I。次峰（在215nm处吸光度的1%）不包含可检测的肽物质。在这些HPLC条件下，乙酸盐在溶剂前沿洗脱，不能定量。在75:25的洗脱液比例下，在任一波长都没有检测到额外的峰，这表明不存在非肽的紫外线吸收材料。
通过使用400MHz NMR光谱仪在脉冲傅立叶变换模式下测定SRM的六个样品的乙酸盐含量。通过将整个样品（约0.5mg）溶解在0.5mL氧化氘（100原子%D）中来制备用于该分析的溶液。向每种溶液中加入少量4,4-二甲基-4-硅戊酸钠2,2,3,3-d4作为内标。因为发现1.922的乙酸甲酯质子信号与血管紧张素I的质子信号重叠，所以最初制备血管紧张素Ⅰ的不含乙酸盐的样品，以确定乙酸盐峰下信号的准确质子计数。通过用0.02mol/L HCl对材料进行两次冷冻干燥来实现从该样品中去除乙酸盐。通过质子NMR对该样品的分析表明其不含乙酸盐，并且在感兴趣的光谱区域中的质子计数为3。此后，在不冷冻干燥的情况下分析SRM的样品，并从乙酸甲酯峰及其潜在信号的总积分中减去三个质子的适当积分值，以获得乙酸峰的积分。三个质子的积分的适当值是通过对高场区域中总共29个质子信号的积分进行平均来确定的，其中包括许多源自血管紧张素I的甲基、亚甲基和次甲基质子的信号。质子信号的数字积分绘制在图表纸上，并手动测量。使用了以下仪器参数：数据集大小，16384点；4µs（30°翻转角度）；频谱宽度，4kHz；扫描次数，2000次；弛豫延迟1.95s。
NMR未检测到除血管紧张素I和乙酸盐以外的其他物质。因此，血管紧张素I的浓度，按差值计，为93.7重量%。
通过从整批血管紧张素I中随机选择10支安瓿来评估灌装安瓿的再现性。将每支安瓿的内容物溶解在2 mL前述HPLC洗脱液（比例81:19）中，并在十八烷基硅烷柱上对100µL等分试样的该溶液进行色谱分析。使用215nm的峰对血管紧张素I进行重复的HPLC测量。安瓿之间的计算变异系数为2.9%。
使用五个随机选择的安瓿测定每个安瓿中的总肽，一式两份。将每个安瓿的内容物溶解在称重量为0.1mol/L的HCl中。将该溶液的等分试样转移到称重的小瓶中，并测定等分试样的重量。然后加入等分的苯丙氨酸溶液（6.2mmol/L）并称重。将所得混合物在6mol/L HCl中水解，并测定氨基酸组成。
肽的量由以下方程计算：
式中，X=安瓿中的肽µmol，M=添加的苯丙氨酸µmol，Ls=加标样品中的亮氨酸峰高度，Pst=标准氨基酸混合物中的苯丙氨酸峰高度，Lst=标准氨基酸混合液中的亮氨酸峰值高度，Ps=加标样本中的苯丙氨酸峰值高度。样品的平均重量为526µg，标准误差为10µg。安瓿之间的计算变异系数为4.0%。当精氨酸的峰高取代亮氨酸的峰高时，获得了类似的结果。这些结果与安瓿灌装研究相结合，表明希望获得非常精确测量的使用者必须在使用前称重血管紧张素I。
通过Benson和Hare的色谱法（Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.Vol.72，p.1391975）测定9个随机选择的样品的氨基酸组成。氨基酸的摩尔比为：天冬氨酸（Asp）1.01，精氨酸（Arg）0.95，缬氨酸（Val）1.05，酪氨酸（Tyr）0.97，异亮氨酸（Ile）1.0l，苯丙氨酸（Phe）1.05、亮氨酸（Leu）1.04和组氨酸（His）1.94。该方法不允许测定D-氨基酸。
然而，通过整合来自血管紧张素I的质子NMR谱的选定的已鉴定共振来测定6个随机选择的样品的氨基酸组成，除了其他氨基酸之外，还能够定量脯氨酸（Pro）。用该方法测定的氨基酸组成摩尔比为：His 9，0.99±0.03；His为6.099±0.05；Phe为1.00±0.03；Tyr，1.03±0.03；Leu，0.98±0.04；Pro，1.00±0.04；Asp，l.04±0.04；Ile为0.98±0.04；Leu+Arg，1.98±0.04；Ile+Val为2.10±0.04。这些结果独立地证实了通过Benson和Hare的方法获得的结果。
通过低分辨率质谱法检测五个血管紧张素I样品的非肽杂质。测量是在电离能量为70 eV、源温度为250°C的高分辨率双聚焦质谱仪上进行的。初步鉴定出以下杂质：乙酸、含至少8个碳原子的烷基含量低、五个样品中三个样品中邻苯二甲酸酯含量极低以及二甲基硅氧烷聚合物含量极低。
